» Протокол фгдс образец: образец и срок годности документа

Содержание

как расшифровать то, что сказал врач? Где можно пройти фгдс


Фиброгастродуоденоскопия, или просто ФГС – «золотой» стандарт в диагностике заболеваний желудочно-кишечного тракта. Подобная методика позволяет выявить патологические изменения в слизистой оболочке органов ЖКТ (желудок и 12-перстная кишка), а также провести дополнительные методы исследования, такие как биопсия. Что показывает ФГДС желудка? С помощью данного обследования лечащий врач получает возможность визуально осмотреть внутреннюю оболочку органа, исследовать ее подозрительные места, а также выполнить биопсию и ряд простых хирургических манипуляций (резекция полипа, остановка кровотечения и т.д.). Пациентов направляют на ФГДС только при наличии у них признаков возможного заболевания желудка (боли в эпигастральной области, тошнота и др.) и с обязательным соблюдением показаний и противопоказаний к процедуре.

Врач оттачивает навыки проведения ФГС на симуляторе

Обследование органов желудочно-кишечного тракта, должно проводиться при соблюдении показаний и противопоказаний, а также только высококвалифицированным специалистом.

Информация о методе

ФГДС желудка – разновидность эндоскопического обследования, которое может быть использовано у различных групп пациентов, в том числе, и с сопутствующими заболеваниями ЖКТ, такими как грыжи пищеводного отверстия диафрагмы, недостаточность кардии и пр. Это дает лечащему врачу возможность осмотреть слизистую оболочку органов ЖКТ, на которой видны изменения, характерные для различных болезней.

Эндоскопия проводится с помощью специального фиброскопа – небольшой трубки, имеющей на своем конце лампочку и видеокамеру. Помимо этого, через фиброскоп может быть дополнительно введено устройство для проведения биопсии или микрохирургических операций.

Показания и противопоказания к обследованию

ФГДС желудка проводится тем пациентам, которые имеют симптомы поражения данного органа или же подозрения по поводу другой патологии:

  • Болевой синдром в верней части живота, связанный с приемом пищи или же, наоборот, возникающий при голоде, что характерно для гастритов и язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки.
  • Чувство дискомфорта или жжения за грудиной, что может быть проявлением недостаточности кардии и гастроэзофагальной рефлюксной болезни.
  • Подозрения на рост доброкачественных или злокачественных опухолей в стенке желудка.
  • Нарушения двигательной активности пищевода и желудка.
  • Частые приступы тошноты или рвота.
  • Исследование 12-перстной кишки показано при косвенных признаках панкреатита, чаще всего связанных с нарушением усвоения жирной пищи и болевым синдром в левой части живота.

Благодаря ФГДС, врач может смотреть на экран дисплея и видеть все изменения слизистой оболочки желудка непосредственно в момент исследования, в результате чего значительно повышается точность диагностики.

Во всех данных случаях эндоскопическое исследование верхних отделов пищеварительного тракта позволяет увидеть патологические изменения в органах. Однако существует ряд противопоказаний, при которых ФГДС не делается:

  • нарушения проходимости пищевода в связи с его стенозом или функциональными нарушениями;
  • тяжелые соматические заболевания с поражением дыхательной или сердечно-сосудистой системы.

Если у человека обнаружены противопоказания к эндоскопии, то процедуру не выполняют, а выбирают другие способы обследования, например, ультразвуковое исследование.

Подготовка к ФГДС

ФГДС делают строго натощак

Основная задача врача до проведения обследования – правильно подготовить к нему пациента. Очень важно провести определенные беседы с человеком, объяснить ему необходимость предстоящего обследования, ход его проведения, а также ознакомить со всеми рисками, присущими данному диагностическому методу. Всем больным рекомендуется сделать общий анализ крови и мочи, что может помочь в обнаружении сопутствующих заболеваний внутренних органов.

Помимо этого, пациент должен отказаться от употребления пищи за 8-10 часов до эндоскопии, особенно, если у него имеется недостаточность кардии. В этот период времени можно пить небольшое количество обычной воды. Подобные меры необходимы для предотвращения развития тошноты и рвоты, а также возможного заброса содержимого желудка в пищевод и дыхательные пути.

Перед процедурой очень важно исключить лекарственные аллергии у человека, так как во время ФГДС могут применяться местные анестетики.

Проведение эндоскопии желудка

Посредством ФГДС желудка выявляются различные заболевания этого органа. Однако высокой информативности процедуры можно добиться только при соблюдении правил ее выполнения.

Выполнение ФГДС желудка должно всегда производиться только в надлежащих для этого условиях и подготовленными врачами.

Гастроскоп

Все исследования проводят в специальном эндоскопическом кабинете. Пациента укладывают на кушетку, чаще всего, на левый бок. С помощью местного анестетика в виде спрея добиваются анестезии слизистой оболочки полости рта. Зачем это нужно? Это позволяет избавиться от рвотного рефлекса, который развивается при введении фиброскопа. После того как анестезия подействовала, пациенту начинают вводить эндоскоп через рот. Постепенно продвигая устройство вглубь пищевода, врач начинает осматривать слизистые оболочки и может выявлять патологию даже на первых этапах обследования.

После осмотра слизистой оболочки желудка можно обследовать 12-перстную кишку, что показано пр

Формализованный протокол. Протокол описания орг. ЖКТр. Хронический гастрит. +

Протокол рентгенологического исследования органов желудочно – кишечного тракта.

Рентгенологическое исследование органов желудочно-кишечного тракта проведено по стан-дартной методике методами цифрового рентгенотелевидения и прицельной рентгенографии в типичных проекциях.

Общая скиалогическая картина пищеварительной трубки свидетельствует об обычной рентгеноанатомической ориентировке и стандартных рентгеноанатомических соотноше-ниях.

При обзорном рентгенотелевидении органов брюшной полости патологических изменений не выявлено. Со стороны поясничного отдела позвоночника .

ПИЩЕВОД Обычного расположения, формы и размеров. Контуры пищевода ровные, чёткие, стенка эластичная. Складки слизистой оболочки в количестве 3 – 4 прослеживаются на всем протяжении. Контрастная взвесь по пищеводу проходит за 4 сек, что свидетельствует об его нормотоническом состоянии. Области физиологических сужений пищевода без особенностей. При пробе Вальсальвы эпифренальная ампула формируется обычно, угол Гисса в пределах нормы, функциональная кардия без особенностей.

ЖЕЛУДОК обычного расположения, формы и размеров. Натощак желудок содержит значительное количество жидкости и слизи, которое в процессе исследования значительно нарастает. В процессе заполнения перистола обычная,  желудок расправляется по ортотоническому типу, по своим анатомо – функциональным характеристикам соответствует  нормостеническому конституциональному типу. После полного расправления желудка пилорический канал располагается на уровне 2 — 3 поясничных позвонков.

Контуры желудка  по малой кривизне ровные, четкие;  по большой  кривизне – неравномерно  зазубренные. 

Складки  слизистой  оболочки располагаются по магистральному типу, направление и количество складок обычное, они отечные, местами сглаженные, деформированные, шириной до 6 — 8 мм. На фоне складок слизистой определяется петлистость рельефа за счет неравномерного увеличения area gastricae, по всей видимости, за счет воспалительного отёка.

Тонус желудка несколько повышен, перистальтика усилена, перистальтические волны симметричные, средней амплитуды, они начинаются в верхней трети тела желудка, прослеживаются в дистальном направлении на всем протяжении и заканчиваются  антральной систолой типа концентрического сокращения.

Эвакуация содержимого происходит неравномерно, ускоренным темпом. Активная и пассивная смещаемость желудка обычная. Через 30 минут в желудке 1/3 контрастной взвеси.

ЛУКОВИЦА 12-ти перстной кишки  обычного расположения, формы и размеров, контуры её ровные, чёткие, стенка эластичная. Складки слизистой оболочки без особенностей. Пассаж контрастной взвеси по луковице обычный.  При исследовании  в 1 и 2 косых проекциях дополнительной информации не выявлено. Разворот петли 12- перстной кишки и  постбуль-барные отделы  без особенностей. Флексура дуодено – еюналис без особенностей. Функци-ональных нарушений со стороны 12 – ти перстной кишки не выявлено.

ТОНКАЯ КИШКА обычного расположения, формы и размеров, контрастирована на значительном протяжении обычно,  рисунок её перистый, смещаемость достаточная,   моторно – эвакуаторная функция тонкой кишки обычная.

ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ:

Признаки хронического поверхностного гастрита (по классификации Ю.Н. Соколова и П.В. Власова).

 

 

СОП ФГДС — что из себя представляет, как проводит и подготовка

Полный текст статьи:

СОП «Фиброгастродуоденоскопия»

Фиброгастродуоденоскопия – это эндоскопический метод исследования пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки. Целью данного метода является визуальное определение патологии верхнего отдела желудочно-кишечного тракта, биопсия пораженной ткани и оценка эффективности лечения.

Цель: стандартизация процедуры проведения фиброгастродуоденоскопии.

Где: эндоскопический кабинет амбулаторно-поликлинической службы (АПС) и круглосуточного стационара (КСС).

Когда: по назначению врача.

Ответственность: ответственным за проведение манипуляции в соответствии с требованиями СОП является медицинская сестра эндоскопического кабинета. Контроль над соблюдением СОП осуществляет старшая медицинская сестра ОЛД.

Нормативно-справочная документация

• Федеральный закон от 21.11.2011 № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации»


• Приказ от 31.05.1996 № 222 «О совершенствовании службы эндоскопии в учреждениях здравоохранения Российской Федерации»


• СП 3.1.3263-15 «Профилактика инфекционных заболеваний при эндоскопических вмешательствах»


• СанПиН 2.1.3.2630-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность»


• СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами


• МУ 3.1.3420-17 «Обеспечение эпидемиологической безопасности нестерильных эндоскопических вмешательств на желудочно-кишечном тракте и дыхательных путях»


• Письмо Роспотребнадзора от 01.12.2008 № 01/14112-8-32 «О совершенствовании мероприятий по обеспечению эпидемиологической безопасности манипуляций гибкими эндоскопами»

Ресурсы

1. Аппараты для ЭФГДС: Олимпус GTF – E – 3, Видеогастроскоп VME – 98 VGT 220992.


2. Загубник, пинцеты, щипцы для биопсии.


3. Перчатки одноразовые – 2 пары.


4. Раствор лидокаина 10% для орошения горла.


5. Раствор формалина 10%, флаконы для гистологического материала, контейнер для транспортировки флаконов в лабораторию.


6. Спирт 70% – 50 г.


7. «Атмос» – отсасыватель, емкость эмалированная для обработки «Атмоса» (банки и шланга), емкость для обработки промывных вод.


8. Контейнеры (на 3 л – 2 шт., 10 л – 3 шт.), заполненные дезраствором согласно технологической карте по обработке эндоскопов.


9. Контейнеры (на 1 л – 2 шт.), заполненные дезраствором согласно технологической карте по обработке загубников.


10. Контейнеры (на 1 л – 2 шт), заполненные дезраствором согласно технологической карте по обработке инструментов.


11. Емкости стеклянные для предварительной обработки эндоскопа на 0,5 л – 2 шт.


12. Лоток металлический для салфеток.


13. Щетки для обработки эндоскопов, шприцы 20 мл – 5 шт., шприц Жанэ.


14. Вода проточная, вода дистиллированная, вода стерильная.


15. Дезрастворы согласно технологической карте. Песочные часы на 1 мин., 2 мин., 5 мин.


16. Салфетки марлевые, одноразовая пеленка впитывающая 1 шт.


17. Емкость для транспортировки эндоскопов из грязной зоны и из чистой зоны.


18. Тест на герметичность (манометр), тест на азопирамовую пробу и фенолфталеиновую пробу, тест-полоска для ДВУ.


19. Металлические стойки и одноразовые чехлы для хранения эндоскопов.


20. Мешки для мусора класса А и класса Б.


21. Салфетки флисовые для обработки поверхностей.


22. Мыло, антисептик и бумажные полотенца для рук.


23. Набор для неотложной помощи при анафилактическом шоке, набор анти-ВИЧ.


24. Журналы для регистрации пациентов.

Основная часть СОП


1. Представиться, произвести идентификацию пациента на основании медицинской документации или паспорта (спросить Ф.И.О. полностью, дату рождения).


2. Зарегистрировать пациента в журнале.


3. Информировать пациента об исследовании, проверить наличие информированного согласия на проведение процедуры.


4. Постелить на кушетку одноразовую простынь.


5. Провести гигиеническую обработку рук, надеть перчатки, маску, шапочку, фартук.


6. Пригласить пациента в процедурную, провести анестезию горла лидокаином.


7. Помочь пациенту лечь на кушетку и принять необходимую позу: на левый бок с вытянутой левой ногой и согнутой в коленном и тазобедренном суставах правой. Правую руку пациент укладывает вдоль туловища, левую – сгибает в локте, выпрямляет спину и голову укладывает щекой на подушечку, наклонив вниз.


8. Медсестра вставляет в рот пациенту загубник и располагается рядом с врачом-эндоскопистом, во время исследования медицинская сестра ассистирует врачу.


9. При необходимости проведения биопсии подает щипцы, помогает положить биопсийный материал во флакон с формалином.


10. После окончания процедуры медсестра берет эндоскоп и проводит первичную очистку эндоскопа, затем помещает эндоскоп в контейнер и перемещает его в грязную зону, где проводится обработка эндоскопа согласно требованиям СП 3.1.3263-15 «Профилактика инфекционных заболеваний при эндоскопических вмешательствах».


11. После завершения процедуры необходимо помочь пациенту встать со стола, предварительно убедившись в его удовлетворительном самочувствии.


12. Больного необходимо предупредить, что нельзя принимать пищу в течение 1-2 часов после исследования.


13. Убрать простынь с кушетки (медицинские отходы класса «Б»), обработать кушетку салфеткой, смоченной дезраствором.


14. Обработать руки гигиеническим способом, поместить перчатки, маску и фартук в контейнер для отходов класса «Б».


15. Зарегистрировать заключение врача по исследованию в журнале, оформить флакон с биопсийным материалом и заполнить бланк направления в гистологическую лабораторию, флакон и направление поместить в контейнер для транспортировки.


16. Выдать пациенту бланк заключения, сообщить, что процедура закончена.


17. Пригласить следующего пациента в кабинет.

Подготовка

· Процедура ФГДС проводится строго натощак!! Последний прием пищи за 12-14 часов до исследования. Нельзя принимать лекарственные средства, курить.


· Пациенту необходимо иметь при себе полотенце и результаты предыдущих обследований.

Параметры оценки и контроля качества выполнения методики

– Соблюдение технологии выполнения манипуляции,


– своевременность выполнения процедуры,


– обеспечение инфекционной безопасности проведения процедуры,


– наличие записи о выполнении назначения в медицинской документации,


– удовлетворенность пациента качеством проведения процедуры,


– удовлетворенность врача качеством проведенной манипуляции.

Распределение данного СОП


Экземпляр Подразделение


Оригинал Главная медицинская сестра


Копия 2 Старшая медсестра ОЛД

Ответственные исполнители ознакомлены и обязуются исполнять:


№ п/п Фамилия Подпись Дата

Подготовка к гастроскопии желудка во второй половине дня

Фиброскоп и видеоэндоскоп представляют собой тонкую трубку, позволяющую врачу просматривать соответствующие органы, разница заключается лишь в используемой технике. Фиброскоп передает изображение с помощью специально обработанного стекловолокна (фибра = волокно), и врач смотрит в него через глазок, видеоэндоскоп имеет на конце устройства электронный датчик, который передает видеосигнал в первичных цветах в микроконтроллеры, которые «складывают» его в конечное изображение и отражают на экране.

гастроскопия

ВЕЧЕРНЯЯ ПОДГОТОВКА И УТРО ПЕРЕД ПРОЦЕДУРОЙ

Последний прием пищи должен быть не позднее 19-30 ч., если ФГДС назначен на утро. Ужин должен быть по возможности легким, нагружать пищеварительную систему большим количеством съестного не следует.

Утром можно выпить свежей воды, но не газированной. Если доктор назначил лекарства, не забудьте их принять. В поликлинику возьмите чистое полотенце, результаты анализов крови и имеющиеся результаты диагностики желудка, проведенные ранее.

Если ФГДС состоится во второй половине дня, утром можно выпить подслащенный чай, но не позднее, чем за 5 часов до процедуры. Если назначены медикаменты, их можно принять не позднее чем за 3 часа до обследования желудка.

Так же не забудьте удалить зубные протезы, глазные линзы перед процедурой — это будет мешать обследованию. Чтобы во время диагностики одежда не сдавливала брюшную полость и грудь, наденьте рубашку свободного покроя и снимите пояс.

Как подготовиться к гастроскопии желудка во второй половине дня

Начинается подготовка к гастроскопии во второй половине дня тоже накануне обследования. В отличие от варианта с проведением ФГДС в утреннее время, разрешается плотно поужинать в день перед диагностикой. Утром можно скушать легкий завтрак: паровой омлет, протертые овощи или творог. Также разрешается выпить травяной или зеленый чай.

гастроскопия

Время для завтрака нужно рассчитать с учетом основных требований, которые содержит стандартная подготовка к ФГДС: между ним и началом гастроскопии должно быть не меньше 8 часов. Например, если диагностика запланирована на 14 часов, позавтракать стоит до 6 утра. Пить воду или другую жидкость разрешается минимум за 3 часа до обследования.

Подготовка к ФГДС желудка: несколько важных рекомендаций

Выполнять рекомендации перед процедурой ФГДС, касающиеся питания, может быть сложно только детям и подросткам. Взрослым же кратковременное голодание дается более легко. Более сложно обстоят дела с тем, чтобы настроить себя на прохождение столь неприятной процедуры. Между тем, психологическая подготовка к гастроскопии нередко игнорируется, из-за чего во время обследования у пациента могут появиться проблемы:

  • психосоматические усиление перистальтики и возникающие на этом фоне тошнота и метеоризм;
  • повышение артериального давления;
  • крайняя неустойчивость психики, истерика, паническая атака.

Чтобы не допустить этого, подготовка накануне ФГДС может предполагать прием успокоительного средства, которое подберет врач. Также можно попрактиковать дыхательные упражнения на расслабление, йогу и медитацию. Отвлечься от страха перед гастроскопией поможет и изучение стандартных вопросов пациентов перед гастроскопией и ответов врачей. Такая теоретическая подготовка поможет избавиться от страха неизвестности.

ИСТОЧНИКИ:
https://proskopiyu.ru/gastroskopiya/podgotovka-k-gastroskopii-zheludka-vo-vtoroj-polovine-dnya.html
https://diagnozpro.ru/skopiya/gastroscopy/fgds-kak-podgotovitsya

Расшифровка ФГДС | Клиника «НЕОМЕД» Санкт-Петербург

Фиброгастродуоденоскопия является одной из базовых диагностических процедур современной медицины, позволяющей оценить состояние не только пищевода и желудка, но и двенадцатиперстной кишки.

Методика ФГДС направлена на выявление воспалительных, язвенных и травматических поражений слизистых оболочек верхних отделов ЖКТ, а также представляет собой ключевой  способ ранней диагностики рака.

В некоторых случаях ФГДС желудка проводят с целью удаления доброкачественных образований, взятия небольшого участка ткани на биопсию и экстренной остановки внутриполостных кровотечений. В связи с таким разнообразием диагностических и терапевтических эффектов, ФГДС — наиболее часто назначаемая процедура в гастроэнтерологической практике.

Что же показывает ФГДС и как расшифровать протокол диагностики?

Узнать подробнее об услуге и её стоимости можно здесь >>

Что показывает ФГДС

Гастроскопия проводится при помощи специального прибора, который состоит из длинной гибкой трубки — эндоскопа — с закрепленной на ней видеокамерой и компьютерной консоли, на которой отражается видеоизображение внутренних органов пациента. Эндоскоп вводится через ротовую полость и продвигается по пищеводу и желудку, вплоть до окончания двенадцатиперстной кишки.
На протяжении всего этого пути доктор оценивает состояние слизистых оболочек, жидкого содержимого и наличие или отсутствие новообразований.

Правильно проведённое исследование желудка ФГДС позволяет выявить такие патологические состояния, как гастрит, колит, язвенная болезнь желудка, эзофагит, дуоденит. Следует также понимать, что ФГДС уже достаточно долго остаётся «золотым стандартом» в диагностике рака желудка и двенадцатиперстной кишки, позволяющим обнаружить онкологию на ранних стадиях развития. Это существенно повышает шансы пациентов на положительный исход терапии!

Клиника НЕОМЕД предлагает своим пациентам провести исследование ФГДС при помощи современного оборудования экспертного класса, а также под контролем опытного дипломированного эндоскописта, что обеспечит достоверность результатов исследования.

Стоимость ФГДС в нашем медицинском центре настолько демократична, что будет абсолютно доступна для любого пациента. В клинике регулярно действуют выгодные предложения на проведение видеогастроскопии.

Расшифровка ФГДС

Если процедура ФГДС проводится без применения общей анестезии или медикаментозного сна, по ходу исследования врач комментирует увиденное, чтобы предоставить пациенту возможность ознакомиться с результатами диагностики. В этом случае дополнительная расшифровка протокола исследования, как правило, не требуется. Пациент передает результаты своему лечащему врачу, который разрабатывает стратегию терапии и даёт рекомендации.

Если же в момент проведения обследования человек пребывал в состоянии медикаментозного сна, возникает необходимость расшифровать показатели диагностики. Здесь следует помнить, что вся диагностическая манипуляция состоит из трёх основных этапов.

  1. Исследование пищевода. В норме пищевод представляет собой трубку длиной 25-30 см, которая имеет четыре последовательно расположенных сужения. Цвет стенок должен быть светло-розовым, а структура тканей — мелковолокнистой. Если в протоколе указано присутствие ярко-красных участков или включений, это может свидетельствовать о наличии воспалительных процессов. Трубка пищевода имеет продольную складчатость, образующую на конце мышечный жом, в виде розетки, который должен быть сомкнут. Уплотнения и утолщения тканей свидетельствуют о развитии новообразований и требуют дополнительных анализов.

  2. Исследование желудка. Цвет стенок желудка может в норме колебаться от бледно-розового до интенсивно-красного. Стенки должны быть описаны в протоколе как гладкие, блестящие, покрытые слизью. Желудок также имеет продольные складки, которые сильнее выражены по большой кривизне органа. Недопустимо наличие белых кратерообразных включений, которые характерны для язвы желудка, а также утолщений стенок, что может свидетельствовать о развитии онкологического процесса. Если ФГДС выявит рак желудка, в протоколе исследования будут описаны размеры, форма и локализация опухоли. При правильной подготовке к процедуре гастроскопии желудка допускается небольшое количество желудочного сока, который может быть взят на химический анализ.

  3. Исследование двенадцатиперстной кишки.  Диаметр двенадцатиперстной кишки здорового человека составляет от 3 до 3,5 см. Длина обычно не превышает 40 см, хотя могут быть незначительные отклонения. Кишечная трубка имеет одну складку, на которой расположены панкреатический и желчный протоки, указанные в протоколе ФГДС как большой и малый дуоденальные сосочки. Первый часто описывают как Фатеров сосочек. По аналогии с пищеводом и желудком, стенки двенадцатиперстной кишки не должны содержать утолщений и ярких включений.

Кроме всего вышеописанного протокол исследования ФГДС всегда содержит характеристику перистальтики ЖКТ, которая у здорового человека должна характеризоваться как нормальная.

Медицинская клиника НЕОМЕД станет лучшим учреждением для прохождения диагностической процедуры ФГДС в Санкт-Петербурге, что обусловлено оптимальными ценами, квалифицированным медицинским персоналом и высокоточным современным оборудованием.

Узнать стоимость процедуры «Видеогастроскопия (ЭГДС)»

Диагностика и лечение Гастроэнтерология Эндоскопия

как расшифровать то, что сказал врач? О регулярности проведения, сроках действия заключения

5
/
5
( 3
votes
)

Несмотря на то, что информация о медицинских исследованиях не скрывается, множество потенциальных пациентов все равно имеет трудности с ознакомлением с процедурами ввиду сложности медтехники и расплывчатости назначений врачей. Поэтому вопросы: “Требуется ли подготовка к гастроскопии желудка, и что надо делать перед обследованием?” могут оставаться нераскрытыми. В связи с этим, раскроем недосказанность.


Что такое гастроскопия желудка

Гастроскопия – это инструментальный метод исследования слизистой органов верхнего отдела желудочно-кишечного тракта, в частности желудка, с использованием гастроскопа. Другое название у обследования — ФГС . Верхний отдел ЖКТ включает:

  1. Пищевод.
  2. Желудок.
  3. 12-перстную кишку.

Отсюда полное название процедуры – ЭГДС (эзофагогастродуоденоскопия). Выполняется это обследование врачом-эндоскопистом.

С помощью видеоэндоскопа врач может:

  • Детализировать отдельные проблемные участки слизистой органа.
  • Взять материал для биопсии.
  • В случае обнаружения опухоли на начальном этапе ее развития удалить фрагмент слизистой.

Крошечного кусочка ткани, полученного при биопсии, достаточно чтобы удостовериться в наличии патологии. Необходимо отличать еще один метод — ФГДС (фиброгастродуоденоскопия). Различие его состоит только в отсутствии осмотра пищевода.

Показания к гастроскопии

Этот метод диагностики лучше всего применять для подтверждения и дифференцировки разных патологий желудка. К примеру:

  • Хронический гастрит.
  • Подозрение на опухоли желудка.
  • Полипы.
  • Желудочное кровотечение.

Симптомы, при которых существует прямое показание к гастроскопии:

  • Болевые ощущения, которые возникают в эпигастрии (подложечной области), связанные с приемом пищи. Боли появляются либо натощак, либо через пару минут после еды.
  • При частом проявлении изжоги .
  • Частая отрыжка с кислым привкусом.
  • Частая тошнота, с возможной последующей рвотой, принятой до этого пищей.
  • Хроническое чувство тяжести и вздутия живота , возникающие после еды.

Очевидно, существуют и противопоказания, а именно:

  • Симптомы гипертонического криза.
  • Нарушение сердечного ритма.
  • Наличие в недавнем времени, или на данный момент инфаркта миокарда, инсульта или сердечно-сосудистой недостаточности.
  • Глубокие психические расстройства поведения, не дающие возможность проведения процедуры.
  • Декомпенсация респираторной системы.
  • Аневризма аорты.

Как готовятся к гастроскопии желудка?

Инструктаж перед процедурой может проводить как гастроэнтеролог, так и врач-эндоскопист.

Так как перед исследованием требуется период голодания минимум 6-8 часов, его проводят утром натощак. Редко гастроскопия проводится с применением наркотических анальгетиков. Тогда период отказа от пищи и жидкости рекомендуется повысить по рекомендациям анестезиолога.

Техника проведения гастроскопии

Сегодня пациенту, в зависимости от уровня обслуживания, могут предложить несколько вариантов проведения такой диагностики:

1. Относительно дешевый обычный метод, но с некоторыми новшествами. Почти у всех людей процесс проглатывания даже самого тонкого шланга эндоскопа вызывает появление рвотного рефлекса. Врачи используют для устранения этой проблемы некоторые препараты, например:

  • Средства для расслабления нервной системы.
  • Лекарства для анестезии глоточного кольца (лидокаин).
  • Миорелаксанты.

2. Вторая методика отличается тем, что пациент может отказаться от кучи препаратов и анестезии, и просто провести исследование во сне. Для этого предварительно назначают снотворные средства короткого действия. Такой подход абсолютно безвреден и практически не имеет противопоказаний.

3. Более дорогой, но отличающийся комфортабельностью — диагностика с использованием специальных одноразовых капсул. Такое устройство оснащено:

  • Цветной мини-видеокамерой.
  • Фонариком.
  • Мини-радиопередатчиком.
  • Батареей питания (обеспечивает 6-8 ч. работы).

Такой метод дает адекватную картину происходящего в ЖКТ пациента. Специальной подготовки не требуется, необходимо лишь:

  1. Проглотить пилюлю, запив обычной водой.
  2. Далее она записывает на видео все, через что держит путь, направляя данные на специальный считыватель.

Главным плюсом является то, что капсула показывает слизистую всего ЖКТ от пищевода до прямой кишки. Есть у метода и минусы – невозможность взять мазок или биопсию.

Диета перед обследованием

Подготовка к диагностированию ЖКТ всегда предусматривает диету, а она, в свою очередь, требует исключения из рациона (за двое суток) некоторых продуктов:

  • Насыщенных растительными жирами (семечки, льняное масло и т.д.).
  • Алкогольных напитков.
  • Кофе.
  • Черного шоколада.
  • Острой пищи.

Вечером перед обследованием надо хорошо поужинать, не употребляя вышеперечисленные продукты. На этот раз в пищу пригодны блюда на пару, салаты и прочая легкая для усвоения пища.

Фото: П

Гастроскопия (ФГДС)

гастроскопия.jpg


Чтобы вылечить заболевание органов пищеварения, его необходимо диагностировать – увидеть. Это позволяет сделать только эндоскопическое исследование, которое уже долгое время является золотым стандартом диагностики заболеваний органов ЖКТ.


Эзофагогастродуоденоскопия (сокращенно гастроскопия, ФГС или ЭГДС) – это визуальный осмотр верхних отделов пищеварительного тракта (пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки) изнутри с помощью специального аппарата – гастроскопа.

Как проходит ФГДС?


Гастроскоп — это ультратонкий эластичный управляемый зонд со встроенной видеокамерой. Толщина наконечника составляет не более 13 мм.


Пациент укладывается на кушетку в положении лежа на боку. Гастроскоп вводится через рот, предварительно в обязательном порядке применяется местная анестезия глотки, которая позволяет существенно сократить дискомфортные ощущения, а также подавить рвотный рефлекс.


Далее гастроскоп спускается вниз по пищеводу вплоть до двеннадцатиперстной кишки.  Изображение с зонда при этом подается на монитор видеостойки Pentax. Врач-эндоскопист при этом подробно и детально осматривает состояние органов и слизистой. 


При необходимости врач может сделать тест на хеликобактер пилори — бактерию, которая обитает на слизистой оболочке желудка и двеннадцатиперстной кишки и может вызывать воспаление. Также врач может провести биопсию — взять небольшие кусочки ткани для последующего гистологического исследования. Это абсолютно безболезненно, но очень информативно — результаты анализа позволяют судить о природе того или иного новообразования. 

Когда проводится ФГДС?


Показания к гастроскопии обширные, но главное из них – это любое, даже незначительное изменение в состоянии желудочно-кишечного тракта.


Гастроскопия позволяет 

  • уточнить или установить диагноз на ранних стадиях развития болезней: воспаления, язвы, эрозии, полипы, опухоли, желудочные кровотечения и др.
  • уточнить локализацию процесса
  • оценить эффективность лечения и лечебных мероприятий
  • отслеживать динамику восстановления в послеоперационном периоде 


Помимо этого, гастроскопию необходимо проводить в так называемых группах риска. К ним относятся люди, имеющие генетическую предрасположенность к различным заболеваниям пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки, а также те, кто имеет отягощенную наследственность. 


Результаты гастроскопии позволяют назначить правильное лечение в каждом конкретном случае.

Гастроскопия в «Медгарде»


Эндоскописты клиники выполняют процедуру профессионально, быстро и максимально бережно. Процедура обычно хорошо переносится, но даже если пациент испытывает дискомфорт, врач будет делать все возможное для минимизации этих ощущений.

Также есть возможность проведения ФГДС во сне. Для этого подбирается специальный состав внутривенного наркоза, который на недолгое время погружает пациента в состояние медикаментозного сна. Это позволяет избежать дискофморта после. В таком случае, процедура проводится строго после консультации с анестезиологом, а после диагностики в течение пары часов нужно будет остаться в дневном стационаре под присмотром врача и медицинского персонала. 

Гастроскоп также позволяет проводить малые операции — удалить полипы и некоторые другие опухоли пищеварительного тракта, извлечь инородные тела, остановить желудочно-кишечные кровотечения. Операции проводятся строго после соответствующей диагностики, и позволяют избежать больших операций на органах брюшной полости.

Как подготовиться к гастроскопии

Протокол иммунопреципитации (IP) | Abcam

Иммунопреципитация — это метод, позволяющий очистить белок. Антитело к интересующему белку инкубируют с клеточным экстрактом, позволяя антителу связываться с белком в растворе. Затем комплекс антитело / антиген извлекают из образца с использованием агарозных гранул, связанных с белком A / G. Это изолирует интересующий белок от остальной части образца. Затем образец можно разделить с помощью SDS-PAGE для вестерн-блоттинга.

Содержание


Буферы для лизиса

Идеальный буфер для лизиса минимизирует денатурацию белка при высвобождении достаточного количества белков из образца. Неионные детергенты, такие как NP-40 и Triton X-100, менее агрессивны, чем ионные детергенты, такие как SDS и дезоксихолат натрия. Другие переменные, которые могут влиять на успех иммунопреципитации, включают концентрацию соли, концентрацию двухвалентных катионов и pH. Чтобы оптимизировать переменные, они должны быть протестированы в следующих диапазонах (из Харлоу и Лейн, стр. 231):

  • Соли: 0–1 M
  • Моющее средство, неионогенное: 0.1–2%
  • Моющее средство, ионное: 0,01–0,5%
  • Двухвалентные катионы: 0–10 мМ
  • ЭДТА: 0–5 мМ
  • pH: 6–9

Неденатурирующий буфер для лизиса

Применение для антигенов, растворимых в детергенте и распознаваемых антителом в нативной форме. Тритон Х-100 может быть заменен НП-40.

  • 20 мМ Tris HCl pH 8
  • 137 мМ NaCl
  • 1% Nonidet P-40 (NP-40)
  • 2 мМ EDTA

Хранить до 6 месяцев при 4 ° C.Непосредственно перед употреблением добавить ингибиторы протеаз.

Для удобства можно приготовить 10% исходный раствор дезоксихолата натрия (5 г на 50 мл). Его необходимо беречь от света.

Буфер для лизиса растворимого белка, не содержащий детергентов

Некоторые растворимые белки могут не требовать использования детергентов. Используйте этот буфер для механического лизиса клеток, такого как гомогенизация с помощью гомогенизатора Даунса.

PBS, содержащий:

  • 5 мМ EDTA
  • 0.02% азид натрия

Хранить до 6 месяцев при 4 ° C. Непосредственно перед употреблением добавить ингибиторы протеаз.

Денатурирующий лизисный буфер для растворимых антигенов, не содержащих детергентов.

Эпитопы нативных белков недоступны для антител, которые распознают только денатурированные белки. При сборе и лизировании клеток нагрейте клетки в денатурирующем буфере для лизиса. Этот метод также можно использовать для антигенов, которые нельзя извлечь из клетки неионными детергентами.Использование ДНКазы1 будет способствовать извлечению белков из хроматина.

Хранить до 1 недели при комнатной температуре.

Непосредственно перед использованием добавьте

  • 10 мМ дитиотреитола или бета-меркаптоэтанола
  • Ингибиторы протеаз 15 Ед / мл DNase1

Промывочные буферы

  • 10 мМ Трис; довести pH до 7,4
  • 1 мМ ЭДТА
  • 1 мМ EGTA; pH 8,0
  • 150 мМ NaCl
  • 1% Triton X-100
  • 0,2 мМ ортованадат натрия
  • Смесь ингибиторов протеазы

Хранить до 6 месяцев при 4 ° C.Непосредственно перед употреблением добавить ингибитор протеазы.


Другие реагенты

Ингибиторы протеаз

Протеолиз, дефосфорилирование и денатурация начинаются сразу после лизиса клеток. Помещение образцов на лед замедлит эти процессы, но также доступны коктейли из ингибиторов протеаз и фосфатаз. Если коктейль не используется, PMSF (50 мкг / мл) и апротинин (1 мкг / мл) являются ингибиторами протеазы, обычно используемыми для иммунопреципитации.

Прочие реагенты

  • Стерильный PBS pH 7.4
  • Стерильный PBS-BSA 1% мас. / Об. (Профильтрованный)
  • Буфер TBST
  • Буфер для загрузки / образца для вестерн-блоттинга
  • VeriBlot для иммунопреципитации вторичных антител, которые предпочтительно обнаруживают невосстановленные, неденатурированные первичные антитела во время вестерн-блоттинг.
  • 100 мМ маточный раствор EDTA получают из 1,86 г EDTA, растворенного в 40 мл воды. Добавьте NaOH, чтобы довести pH до 7,4. Наконец, доведите общий объем до 50 мл.

Подготовка лизатов

Лизаты из клеточной культуры (неденатурирующие)

  1. Поместите чашку для культивирования клеток на лед и промойте клетки ледяным PBS.
  2. Слить PBS, затем добавить ледяной буфер для лизиса (1 мл на 107 клеток / чашку 100 мм2 / колбу 150 см2; 0,5 мл на 5×106 клеток / чашку 60 мм2 или колбу 75 см2).
  3. Соскребите прилипшие клетки с чашки с помощью холодного пластикового скребка для клеток, затем осторожно перенесите суспензию клеток в предварительно охлажденную микроцентрифужную пробирку.
  4. Поддерживайте постоянное перемешивание в течение 30 минут при 4 ° C.
  5. Центрифуга в микроцентрифуге при 4 ° C.

    В зависимости от типа ячейки может потребоваться изменить силу и время центрифугирования.Рекомендуемое значение — 20 минут при 12000 об / мин, но вы должны оптимизировать это для вашего конкретного эксперимента (например, лейкоцитам необходимо очень легкое центрифугирование).

  6. Осторожно извлеките пробирки из центрифуги и поместите на лед. Аспирируйте супернатант и поместите в свежую пробирку, оставленную на льду, и выбросьте осадок.

Лизаты из культуры клеток (денатурирующие)

  1. Добавьте 100 мкл денатурирующего буфера для лизиса к 0,5–2×107 клеток.
  2. Хорошо перемешайте, энергично встряхивая в течение 2–3 секунд на максимальной скорости.Перенести клеточную суспензию в пробирку для микроцентрифуги.

    На этой стадии раствор может быть вязким из-за высвобождения ДНК.

  3. Нагрейте образцы до 95 ° C в течение 5 минут до денатурирования.
  4. Разбавьте суспензию 0,9 мл неденатурирующего буфера для лизиса. Осторожно перемешайте.

    Избыток 1% Triton X-100 в неденатурирующем буфере для лизиса гасит SDS в исходном денатурирующем буфере.

  5. Фрагментируйте ДНК, пропуская лизированную суспензию 5–10 раз через иглу, прикрепленную к шприцу на 1 мл.

    Повторяйте механическое прерывание, пока вязкость не снизится до приемлемого уровня. Если ДНК не полностью переварена и фрагментирована, это может помешать разделению осадка и супернатанта после центрифугирования .

  6. Инкубируйте на льду 5 мин.
  7. Выполните иммунопреципитацию

Лизаты из ткани

  1. Рассеките ткань чистыми инструментами и как можно быстрее. По возможности делайте это на льду, чтобы предотвратить разложение протеазами.
  2. Поместите ткань в микроцентрифужные пробирки с круглым дном и погрузите в жидкий азот для быстрого замораживания. Храните образцы при -80 ° C для дальнейшего использования или на льду для немедленной гомогенизации.
  3. Для кусочка ткани массой ~ 5 мг быстро добавьте в пробирку ~ 300 мкл буфера для лизиса и гомогенизируйте с помощью электрического гомогенизатора.
  4. Промойте лезвие дважды еще 300 мкл буфера для лизиса на одно полоскание, а затем поддерживайте постоянное перемешивание в течение 2 часов при 4 ° C (например, поместите на орбитальный шейкер в холодильник).

    Объемы буфера для лизиса должны определяться в зависимости от количества присутствующей ткани. Белковый экстракт не должен быть слишком разбавленным, чтобы избежать потери белка и минимизировать объем образца для загрузки в гели. Минимальная концентрация — 0,1 мг / мл; оптимальная концентрация — 1–5 мг / мл.

    Если требуются денатурированные образцы, используйте денатурирующий лизисный буфер и выполните шаги 2–5 из описанного выше протокола денатурирования.

  5. Центрифуга в течение 20 мин при 12000 об / мин при 4 ° C в микроцентрифуге.Осторожно извлеките пробирки из центрифуги и поместите на лед, аспирируйте супернатант и поместите в свежую пробирку на льду. Выбросьте гранулы.

Предварительная очистка лизатов

Предварительная очистка лизата может помочь уменьшить неспецифическое связывание и уменьшить фон. Однако, если окончательное обнаружение белка проводится вестерн-блоттингом, предварительная очистка может не потребоваться, если только контаминирующий белок не мешает визуализации интересующего белка.

  1. Добавьте либо 50 мкл нецелевого антитела того же вида и изотипа, что и антитело иммунопреципитации, либо нормальную сыворотку (часто предпочтительнее кроличья, см. Harlow and Lane, стр. 243) к 1 мл лизата. Инкубируйте 1 ч на льду.
  2. Добавьте к лизату 100 мкл суспензии шариков.
  3. Инкубируйте 10–30 мин при 4 ° C при осторожном перемешивании.
  4. Вращение в микроцентрифуге при 14000 x g при 4 ° C в течение 10 мин.
  5. Отбросить осадок с шариками и оставить супернатант для иммунопреципитации.

    Для увеличения выхода гранулы можно промыть еще 1 или 2 раза в буфере для лизиса, а супернатанты собрать вместе.

Важно убедиться, что удаляется как можно больше нормальной сыворотки, поскольку это будет конкурировать с антителом против интересующего антигена. Чтобы проверить это, можно провести тест с буфером для лизиса вместо образца, выполнив все шаги предварительной очистки, как указано выше.

Нанесение геля из полученного супернатанта и окрашивание кумасси покажет, эффективно ли удаляется сывороточный Ig.Если сыворотка не была удалена в достаточной степени, будут присутствовать полосы 50 и 25 кДа для тяжелых и легких цепей; его присутствие может способствовать слабой иммунопреципитации. Рассмотрите возможность уменьшения количества сыворотки или увеличения количества шариков, инкубированных с вашими образцами на этапе предварительной очистки


Иммунопреципитация

Существует несколько различных методов иммунопреципитации белков. Первый подход (метод А) заключается в смешивании антитела с образцом белка с последующим добавлением протеина A / G.Этот метод обеспечивает высокую чистоту белка; однако антитела также элюируются вместе с представляющим интерес белком, что иногда создает трудности при вестерн-блоттинге.

Второй подход (метод B) заключается в связывании антитела с гранулами белка A / G и последующем смешивании с антигеном. Этот метод дает меньший выход, чем первый, но позволяет избежать проблемы совместной элюции антител.

Метод A

Иммунопреципитация с антителами в растворе:

  1. На льду в микроцентрифужной пробирке добавьте 10–50 мкг клеточного лизата плюс рекомендованное количество антител (см. Ниже).Обычно в пилотных экспериментах фиксированное количество белка осаждается за счет увеличения количества антител.

    Рекомендуемую концентрацию антител см. В таблице данных по антителам. В качестве руководства используйте

    1–5 мкл поликлональной антисыворотки
    1 мкг аффинно очищенного поликлонального антитела
    0,2–1 мкл асцитной жидкости (моноклональное антитело)
    20–100 мкл супернатанта культуры (моноклональное антитело)

  2. Инкубируйте образец с антителом в течение 1–12 ч при 4 ° C, желательно при осторожном перемешивании или вращении.Продолжительность инкубационного периода зависит от количества белка и аффинных свойств антитела.
  3. Тем временем приготовьте шарики сефарозы. Если вы используете моноклональные антитела, выберите бусины сефарозы, связанной с G-белком. При использовании поликлональных антител обычно подходят гранулы сефарозы, связанной с протеином А (см. Таблицу «Выбор белковых шариков» ниже). Если шарики представлены в виде порошка, инкубируйте 100 мг шариков в 1 мл 0,1 М PBS, промойте в течение 1 часа, чтобы они набухли, затем центрифугируйте, удалите супернатант и выбросьте.

    Добавьте 1 мл PBS, 0,1% BSA, перемешайте в течение 1 ч, используя ротатор Eppendorf, и дважды промойте PBS. Удалите супернатант и добавьте 400 мкл буфера, содержащего ингибиторы протеаз (может быть таким же, как буфер для лизиса). Теперь суспензия готова к использованию. Может храниться при температуре 4 ° C несколько дней; в течение более длительного времени держите шарики в PBS с 0,02% азидом (тщательно промойте шарики в день использования и добавьте свежий лизисный буфер). Вы также можете купить предварительно набухшие шарики в виде готовой суспензии.

    Рекомендуется использовать наконечники для пипеток с обрезанным концом, чтобы не повредить шарики.

    При использовании антител IgM не используйте шарики, конъюгированные с протеином A или протеином G. Используйте анти-IgM-связанные с протеином А или шарики с протеином G. Затем IgM свяжется с гранулами путем связывания с антителом против IgM.

  4. Хорошо перемешайте суспензию и добавьте 70–100 мкл шариков в каждый образец. Всегда храните образцы на льду. Бусинки будут прилипать к краям наконечника, поэтому постарайтесь свести к минимуму перемещение пипетки и используйте надрез на 5 мм от верха.
  5. Инкубируйте смесь лизатных шариков при 4 ° C и роторном перемешивании в течение 4 часов (оптимальное время инкубации можно определить в предварительном эксперименте).
  6. Выполните следующие шаги стирки.

Метод B

Иммунопреципитация конъюгатом антитело-агароза:

  1. Чтобы приготовить агарозу / сефарозу с белком A или G, выполните шаг 3 в методе A.
  2. Добавьте приблизительно 70–100 мкл суспензии белка A -, или G-, или L-агарозный конъюгат в микроцентрифужные пробирки.
  3. Добавьте 10 мкл первичного антитела. В качестве ориентира используйте разведение, рекомендованное в паспорте антител для иммунопреципитации.
  4. Инкубируйте смесь антитело-гранулы в течение 1–4 ч при 4 ° C, осторожно перемешивая смесь на подходящем шейкере.
  5. Центрифуга при 1000–3000 x g в течение 2 мин при 4 ° C и слить супернатант.
  6. Добавьте к смеси 1 мл буфера для лизиса, продолжая осторожно перемешивать, а затем центрифугируйте при 3000 x g в течение 2 минут при 4 ° C. Повторите эту стирку дважды.
  7. После промывания смеси гранул и антител добавьте 10–50 мкг клеточного лизата.
  8. Инкубируйте смесь конъюгата лизат-гранула / антитело при 4 ° C при роторном перемешивании в течение от 4 часов до ночи, если требуется (оптимальное время инкубации можно определить в предварительном эксперименте).
  9. По окончании инкубации продолжите промывку, указанную ниже.

Промывка

  1. Центрифугируйте пробирки, удалите супернатант с шариков и выбросьте. Теперь интересующий белок должен быть специфически связан с антителом, покрывающим гранулы.
  2. Промойте шарики промывочным буфером или буфером для лизиса три раза, чтобы удалить неспецифическое связывание. Для каждой промывки осторожно перемешайте шарики с промывочным буфером, центрифугируйте при 4 ° C и удалите супернатант.
  3. Осторожно удалите как можно больше промывочного буфера с шариков.Теперь комплекс готов к элюированию с шариков.

Элюция

Для элюирования белка из гранул можно использовать один из трех методов. Буфер SDS является самым жестким, он также элюирует нековалентно связанные антитела и фрагменты антител вместе с интересующим белком. С другой стороны, глициновый буфер мягко элюирует белок с уменьшенным количеством элюированного антитела.

Глицин Буферное элюирование

В этой процедуре комплекс элюируется из гранул путем подкисления с использованием буфера, содержащего 0.1–0,2 М глицин, pH 2,0–3,0. Низкий pH глицина ослабляет взаимодействие между антителом и гранулами. Этот метод выгоден, поскольку гранулы можно повторно использовать после удаления глицинового буфера. Однако элюированный образец следует немедленно нейтрализовать трис, pH 8,0–8,5.

  1. Элюируйте шарики (50 мкл) 3 x 50 мкл 0,2 М глицина pH 2,6 (1: 1), инкубируя образец в течение 10 минут при частом встряхивании перед осторожным центрифугированием.
  2. Объедините элюат и нейтрализуйте, добавив равный объем Трис pH 8.0.

    При необходимости повторите эти шаги.

  3. Нейтрализуйте шарики, промыв 2 раза 150 мкл буфера для лизиса (без детергента) и объедините с элюатом.
  4. Запустите образцы с помощью вестерн-блоттинга, чтобы проверить осаждение белков.

Элюирование буфера SDS

Комплекс Ag-Ab элюируется с гранул путем нагревания или кипячения образцов в загрузочном буфере с денатурирующим SDS. Этот метод выгоден тем, что метод экстракции очень эффективен, а полученный образец более концентрированный.

  1. Элюируйте 50 мкл шариков путем нагревания в 50 мкл 2-кратного загрузочного буфера SDS без DTT в течение 10 мин при 50 ° C.
  2. Гранулы гранул, перенесите супернатант в новую пробирку и добавьте DTT в концентрации 100 мМ (элюция 1).
  3. Добавить 50 мкл 2 x SDS-буфера с DTT к осажденным шарикам (элюция 2).
  4. Кипятите элюированные образцы в течение 5 минут и анализируйте содержание образца с помощью вестерн-блоттинга. Как правило, целевой белок должен присутствовать как в элюции 1, так и в элюции 2, хотя количество в каждом будет варьироваться, и элюция 2 будет иметь больше контаминации IgG, чем элюция 1.

Буферное элюирование мочевины

Этот метод выгоден для масс-спектрометрии, поскольку образец может быть переварен протеолитическими ферментами.

  1. Промыть шарики буфером для предварительной промывки мочевины (50 мМ Трис, pH 8,5, 1 мМ EGTA, 75 мМ KCl). Удалите весь остаточный супернатант.
  2. Добавьте 2–5 объемов буфера для элюирования мочевины (6–8 М мочевина, 20 мМ Tris pH 7,5 и 100 мМ NaCl) и вращайте в течение 30 минут при комнатной температуре с частым встряхиванием перед осторожным центрифугированием.
  3. Повторите этот процесс еще как минимум два раза, чтобы убедиться, что весь захваченный комплекс высвободился из шариков. Гранулы гранулы и удалить мочевину в новую пробирку.
  4. Запустите образцы с помощью вестерн-блоттинга, чтобы проверить осаждение белков.

Выбор правильных бусинок — сводная таблица

Обозначение:
+++ = сильное связывание
++ = среднее связывание
+ = слабое связывание
— = без связывания

Видовой изотип иммуноглобулина

Белок A

Белок G

Человеческий IgG1

++10+

++10 + 9400003

+++ 9400003

++

Человеческий IgG2

+++

+++

Человеческий IgG3

+++

+++

Человеческий ++

3

+

90 405

+++

10 все изотипы

000

10404

+++

Человеческий IgM

Использовать антитела против человеческого IgM

Человеческий IgE

+

Человеческий IgA


+

0

+++

Мышь IgG2a

+++

+++

Мышь IgG2b

++

++

++

Мышиный IgG3

+

+

Мышиный IgM

Использовать anti Mouse IgM

Крысиный IgG2a

IgG2b крысы

++

IgG2c крысы

10 ++

10 ++

Корова все изотипы

++

+++

++

Морская свинка все изотипы

+++

++

Хомяк все изотипы

10 9405
03

10 9405 904

Лошадь все изотипы

+

+++

Свинья все изотипы

+

++

Кролик все изотипы

+++

++

++

Овца

+++


Ссылки

Протоколы предоставлены Abcam «AS-IS» на основе экспериментов в лабораториях Abcam с использованием реагентов и продуктов Abcam; ваши результаты от использования протоколов вне этих условий могут отличаться.

.

Протокол непрямой проточной цитометрии (FACS)

Общая процедура:

  1. Соберите и промойте клетки, затем определите общее количество клеток.

    Клетки обычно окрашивают в полистироле с круглым дном 12 x 75 мм. 2 Пробирки Falcon. Однако они могут быть окрашены в любом контейнере, для которого имеется подходящая центрифуга, например в пробирках, пробирках Эппендорфа и 96-луночных круглодонных микротитровальных планшетах. В общем, клетки следует вращать достаточно сильно, чтобы супернатант можно было удалить с небольшой потерей клеток, но не настолько сильно, чтобы клетки было трудно ресуспендировать.

    Всегда полезно проверять жизнеспособность клеток, которая должна составлять около 95% и не менее 90%.

  2. Ресуспендируйте клетки примерно до 1-5 x 10 6 клеток / мл в ледяном PBS, 10% FCS, 1% азиде натрия.

    Используйте ледяные реагенты / растворы и поддерживайте клетки при 4 ° C, поскольку низкая температура и присутствие азида натрия предотвращают модуляцию и интернализацию поверхностных антигенов, что может привести к потере интенсивности флуоресценции.


  3. Добавьте 100 мкл клеточной суспензии в каждую пробирку.
  4. Добавьте 0,1-10 мкг / мл первичного антитела. При необходимости разведения следует производить в 3% BSA / PBS.
  5. Инкубируйте не менее 30 мин при комнатной температуре или 4 ° C в темноте.
  6. Промыть клетки 3 раза центрифугированием при 400 g в течение 5 мин и ресуспендировать их в ледяном PBS. Возможно, вам потребуется отрегулировать условия центрифугирования (силу и время) для используемых типов клеток.
  7. Разбавьте вторичное антитело, меченное флуорохромом, в 3% BSA / PBS в оптимальном разведении (согласно инструкциям производителя), а затем ресуспендируйте клетки в этом растворе.
  8. Инкубируйте не менее 20-30 минут при комнатной температуре 4 ° C. Инкубацию необходимо проводить в темноте.
  9. Промыть клетки 3 раза центрифугированием при 400 g в течение 5 мин и ресуспендировать их в ледяном PBS, 3% BSA, 1% азиде натрия.
  10. Немедленно хранить суспензию клеток при 4 ° C в темноте.
  11. Анализ: для получения наилучших результатов как можно скорее проанализируйте клетки на проточном цитометре.

Мы рекомендуем анализ в тот же день. Для длительного хранения (16 часов), а также для большей гибкости в планировании времени на цитометре ресуспендируйте клетки в 1% параформальдегиде, чтобы предотвратить порчу.

ФИКСАЦИЯ:

Если вам нужно подождать более 1 часа перед анализом, вам может потребоваться исправить клетки после шага 5. Это может сохранить их в течение нескольких дней (это стабилизирует светорассеяние и инактивирует большинство биологически опасных агентов) . Контроли потребуют фиксации с использованием той же процедуры. Клетки не следует фиксировать, если необходимо, чтобы они оставались жизнеспособными. Доступно несколько методов. Фиксация для разных антигенов потребует оптимизации со стороны пользователя.

  1. Параформальдегид 0.От 01% до 1% только в течение 10-15 минут, 100 мкл на образец.
  2. Ацетон или метанол:

Пробирки из полистирола / пластика N / B не подходят для использования с ацетоном

Добавьте 1 мл ледяного ацетона к каждому образцу.
Осторожно перемешайте. Поставить при -20 ° C на 5-10 мин.
Центрифуга, промыть дважды в PBS 1% BSA.


Не добавляйте азид натрия в буферы, если вы заинтересованы в восстановлении функции клеток, например, если клетки должны быть собраны для функциональных анализов. Подавляет метаболическую активность.


Ознакомьтесь с нашими протоколами и методами проточной цитометрии.

Ознакомьтесь с нашим бесплатным онлайн-обучением по проточной цитометрии, разработанным, чтобы помочь вам максимально эффективно использовать этот мощный метод.


.

Общие сведения о протоколе описания сеанса (SDP)

Невозможно по-настоящему понять протокол SIP без понимания его кузена, протокола описания сеанса (SDP). В то время как SIP занимается установлением, изменением и отключением сеансов, SDP занимается исключительно медиа в этих сеансах. То, что SIP переводит носители в другой протокол, не случайно. Создатели SIP решили сделать его агностическим для СМИ, и это разделение церкви и государства только усиливает это.SIP делает то, что умеет лучше всего, и оставляет носители для SDP.

Итак, что такое SDP? Ну, это именно то, что написано в названии. Это протокол, который описывает медиа сеанса. Важно понимать, что это не переговоры со СМИ. SIP-клиенты не используют его, чтобы возвращаться и спрашивать: «А вы можете это сделать?» прежде, чем окончательно остановиться на общем медиа-протоколе, таком как G.711. Вместо этого одна сторона говорит другой стороне: «Вот все типы носителей, которые я могу поддерживать — выберите один и используйте его.”

SDP состоит из серии строк = , где — это один буквенный символ с учетом регистра, а — структурированный текст.

SDP состоит из трех основных разделов — описания сеанса, времени и медиа. Каждое сообщение может содержать несколько описаний синхронизации и мультимедиа, но только одно описание сеанса.

Ниже приведены определения этих разделов и их возможное содержание. Важно знать, что не каждый символ / значение может присутствовать в сообщении SDP.

Описание сеанса

v = (номер версии протокола, в настоящее время только 0)

o = (инициатор и идентификатор сеанса: имя пользователя, идентификатор, номер версии, сетевой адрес)

s = (имя сеанса: обязательно с хотя бы одним символом в кодировке UTF-8)

i = * (название сеанса или краткая информация)

u = * (URI описания)

e = * (ноль или более адресов электронной почты с дополнительными именами контактов)

p = * (ноль или более телефонных номеров с дополнительными именами контактов)

c = * (информация о подключении — не требуется, если присутствует на всех носителях)

b = * (ноль или более строк информации о пропускной способности)

Одно или несколько описаний времени (строки «t =» и «r =»; см. Ниже)

z = * (корректировка часового пояса)

k = * (ключ шифрования)

a = * (ноль или более строк атрибутов сеанса)

Ноль или более описаний носителей (каждое начинается со строки «m =»; см. Ниже)

Временное описание (обязательно)

t = (время активности сеанса)

r = * (ноль или более повторений)

Описание носителя (при наличии)

m = (имя носителя и транспортный адрес)

i = * (заголовок носителя или информационное поле)

c = * (информация о подключении — необязательно, если включена на уровне сеанса)

b = * (ноль или более строк информации о пропускной способности)

k = * (ключ шифрования)

a = * (ноль или более строк атрибутов мультимедиа — переопределение строк атрибутов сеанса)

Например,

Ниже приведен пример фактического сообщения SDP.

v = 0

o = Андрей 2890844526 2890844526 IN IP4 10.120.42.3

s = Блог SDP

c = IN IP4 10.120.42.3

т = 0 0

m = аудио 49170 RTP / AVP 0 8 97

a = rtpmap: 0 PCMU / 8000

a = rtpmap: 8 PCMA / 8000

a = rtpmap: 97 iLBC / 8000

м = видео 51372 RTP / AVP 31 32

a = rtpmap: 31 ч 361/

Если вы не работали с SIP и SDP какое-то время, это, вероятно, будет выглядеть непонятно.Однако это действительно не так уж и плохо, если вы знаете, что искать, а что можно спокойно игнорировать. Это то, на что я обращаю внимание в сообщении SDP.

c = Это сообщит мне IP-адрес, откуда будет поступать носитель и куда он должен быть отправлен.

m = Для каждого типа носителя будет отдельная строка. Например, если ваш клиент может поддерживать звук в реальном времени, будет строка m = audio. Если ваш клиент может поддерживать видео в реальном времени, будет отдельная строка m = video. Каждая строка мультимедиа указывает количество кодеков, которые будут определены в строках атрибутов.

a = Будет строка атрибутов для каждого кодека, объявленного в строке мультимедиа.

Глядя на приведенный выше пример, я сразу это вижу.

Клиент будет использовать IP версии 4 с адресом 10.120.42.3. Он может поддерживать три аудиокодека и один видеокодек. Аудиокодеки: G.711 uLaw (PCMU), G.711 aLaw (PCMA) и iLBC. Аудиокодеки будут использовать порт 49170 и все будут иметь частоту дискретизации 8000 Гц. Видеокодек — H.261 на порту 51327. В 99,9% случаев я могу спокойно игнорировать любые другие значения SDP, которые могут присутствовать.

После получения сообщения SIP с указанным выше SDP в теле сообщения получатель ответит собственным SDP с указанием своего IP-адреса, портов и значений кодека. Получатель также выберет из списка кодеков отправителя, какие из них он будет использовать, и потенциально запустит медиапотоки в реальном времени. Неписаное правило SDP состоит в том, что если возможно, вы должны использовать первый кодек указанного типа, но это не обязательно. Если отправитель говорит, что может что-то сделать, ему лучше быть готовым к работе с носителями этого типа, независимо от того, в каком порядке они были перечислены.

Я надеюсь, что это поможет разобраться в том, что может показаться трудным. Если возможно, возьмите несколько следов Wireshark нескольких вызовов SIP и посмотрите, сможете ли вы выяснить, как описываются и используются носители.

Между прочим, это 50-я статья, которую я написал для этого блога. Поздравления мне.

Нравится:

Нравится Загрузка …

Связанные

.Протокол обработки тканей

IHC | Abcam

Ткань обезвоживается, очищается, а затем инфильтрируется средой для проведения срезов. Парафиновый воск — наиболее распространенная среда, используемая для иммуноокрашивания.

Парафиновая обработка ткани

  1. После фиксации промойте ткань PBS до полного удаления фиксатора.
  2. Обезвоживайте ткань этанолом в следующей последовательности:
    Раствор Время инкубации
    50% этанол 10 мин
    70% этанол 10 мин
    80% этанол 10 мин
    95% этанол 10 мин
    100% этанол 10 мин
    100% этанол 10 мин
    100% этанол 10 мин
  3. Обменяйте этанол на ксилол в следующей последовательности:

    90 014

    Раствор Время инкубации
    2: 1 Этанол: ксилол 10-15 мин
    1: 1 Этанол: ксилол 10 -15 мин
    1: 2 Этанол: ксилол 10-15 мин
    100% ксилол 10-15 мин
    100% ксилол 10-15 мин
    100% ксилол 10-15 мин
  4. Обмен ксилола на парафин.Следующие шаги выполняются в вакуумной печи, установленной на 54-58 ° C. Можно использовать Paraplast X-tra ™ или Paraplast Plus ™ (последний содержит ДМСО для облегчения инфильтрации). Не допускайте, чтобы температура парафина превышала 60 ° C в течение длительного периода времени, поскольку это приведет к разложению полимеров парафина и сделает его твердым и хрупким.
    Раствор Время инкубации
    2: 1 Ксилол: парафин 30 минут
    1: 1 Ксилол: парафин 30 минут
    1: 2 Ксилол: парафин 30 мин
    100% парафин 1-2 часа
    100% парафин 1-2 часа или в течение ночи
  5. Залейте свежий новый парафин и сориентируйте ткань до того, как она затвердеет (вертикально для эмбрионов).

Заливка замороженной ткани

  1. Готовая к обработке ткань должна быть зафиксирована и храниться в PBS.
  2. Инфильтрация сахарозы.
    Раствор Время инкубации
    10% сахароза 15 минут или пока образец не упадет на дно флакона
    2: 1 10% сахароза: 30% сахароза

    15 минут или до образца капли на дно флакона

    1: 1 10% Сахароза: 30% Сахароза 15 мин или пока образец не упадет на дно флакона
    1: 2 10% Сахароза: 30% Сахароза 15 мин или пока образец не упадет на дно флакона
    30% сахароза 15 мин или пока образец не упадет на дно флакона
    30% сахароза 15 мин или пока образец не упадет на дно флакона
    30% сахароза 15 мин или пока образец не упадет на дно флакона
  3. Частично заполните контейнер с сухим льдом сухим льдом и добавьте метанол, чтобы создать прохладную баню, дайте отстояться.
  4. Пометьте лунки Tissue Tek номером каждого животного и заполните замораживающим компаундом OTC (TissueTek)

    .

    Пометьте лунки Tissue Tek номером каждого животного и заполните замораживающим компаундом OTC (TissueTek).

  5. Удалите излишки сахарозы с ткани, промокнув салфеткой Kimwipes, и поместите ткань в центр лунки, заполненной безрецептурным препаратом.
  6. Ориентируйте ткань на дно лунки и заморозьте, плавая в ванне с метанолом. ВНИМАНИЕ: не допускайте попадания метанола на ОТС, он не замерзнет правильно.
  7. Поместите замороженные блоки ткани в морозильную камеру -20 ° C после того, как они заморозятся.
  8. Блоки ткани готовы к нарезке после полного замораживания. Не храните слайды в криостате на ночь, они высохнут и никуда не денутся. Также рекомендуется поместить всю ткань в полиэтиленовые пакеты в морозильную камеру с морозильной камерой -20, чтобы уменьшить высыхание во время хранения.
  9. Срезы на криостате.

Гликолемметакрилат (GMA) Встраивание

Преимущества использования GMA

  • Смешивается с водой, не требует стадий дегидратации и регидратации.
  • Нет необходимости удалять смолу перед окрашиванием.
  • Низкая вязкость, легко проникает в ткани.
  • Без перекрестного связывания, без поиска антигена.
  • Хорошая презентация антигена.
  • Хорошая сохранность морфологии (клеточная локализация).
  • Низкотемпературная обработка.
  • Можно разрезать на очень тонкие срезы (1-2 мкм), максимально используя очень маленькие биопсии — очень хорошее разрешение

Фиксация

Для GMA можно использовать несколько методов фиксации ткани.

Фиксация ацетоном обычно дает хорошие результаты. Используйте следующий метод:

  1. Немедленно поместите биопсию в ледяной ацетон, содержащий ингибиторы протеаз.
  2. Зафиксируйте на ночь -20 ° C.
  3. Заменить фиксатор ацетоном (комнатная температура) 15 мин.

Обработка

  1. Поместите биопсию в метилбензоат на 15 минут (это способствует проникновению GMA в ткани).
  2. Поместите биопсию в 5% метилбензоат в GMA 4 ° C.3 раза по 2 ч.

Встраивание

Следуйте инструкциям производителя комплекта для встраивания в сам GMA. GMA необходимо будет полимеризовать с использованием катализатора (входит в коммерчески доступные наборы) и оставить на 48 часов при 4 ° C.

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *